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高效空气过滤器在细胞培养实验室相关的技术应用
资料来源:广州启绿空气净化设备有限公司   日期:2012-10-26   人气:   标签:高效空气过滤器 细胞培养实验室 高效过滤器
       高效空气过滤器,细胞培养实验室,高效过滤器--高效空气过滤器在细胞培养实验室相关的技术应用,胚胎干细胞(embryonic stem cells,ES)的体外培养要求增殖的同时保持未分化的状态,因此,我们要进行体外培养胚胎干细胞,必须环境中满足两个条件:细胞生长因子和分化抑制因子。体外培养的成纤维细胞可以分泌细胞生长因子和分化抑制因子,前者可以促进ES细胞的增值,后者可以有效的抑制ES 的自主分化。目前,可以用来制作饲养层的细胞有多种,其中原代小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embryonic fibroblast, MEF)取材方便,易于铺层,分泌能力强而成为ES 细胞首选的饲养层细胞。
       将原代培养的MEF 细胞进行传代,多为3-6 代,这样不仅可以使得MEF 细胞高效空气过滤器的纯度较高,而且生长状态也很好。在制备饲养层前将MEF 细胞用丝裂霉素C 或射线照射预处理,抑制DNA 的复制使其在保持分泌功能的基础上失去增值能力,以免与ES 的生长发生竞争。在具体实验中,MEF 细胞的原代分离时胎龄的选择,作为饲养层使用时细胞代数的选择,丝裂霉素处理的浓度都会影响饲养层培养体系的质量。
       胎龄过大,则成纤维细胞的成分降低,分离效率低下,且易混杂其他细胞,难以去处。若胎龄过小,胚胎形态小,躯干部分不易分辩,操作困难。细胞代数过多,则出现衰老征象;细胞代数过少,不容易纯化。丝裂霉素的浓度处理和处理时间直接影响细胞的状态。
【实验材料】
小鼠(7-8 周龄雌性小鼠 10 只, 4 周龄雄性小鼠20 只)
【实验试剂】
细胞培养液:DMEM-High glucose 4.5g/l+10%胎牛血清+青霉素+链霉素
L-谷氨酰胺2mmol/L
PBS 液
消化液:含0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA
冻存液:细胞培养液+10%DMSO
丝裂霉素C 20mg/L
【实验方法与步骤】
1.MEF 的获取高效过滤器
(1)激素处理小鼠,同期发情和超数排卵(2)2:1 合笼过夜(3)取出有阴道栓
的开始记时间为0.5 天(4)取出妊娠12.5-14.5 天的小鼠为实验材料(5)无菌取
出胚胎(6)去除头、尾、内脏和四肢,仅留躯干部(7)用眼科剪刀剪成1mm3组
织块(8)0.25%胰蛋白酶消化20min/室温,每隔5min振荡一次(9)过滤(200 目
筛网)并收集滤液(含有单个的MEF)
2. 接种并进行原代培养
(1)细胞计数,按照1*105个/ml接种于培养瓶中(2)48 小时换液,4-5 天后传代高效空气过滤器,细胞培养实验室,高效过滤器
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